| dc.description.abstract | Etter oppdagelsen og bevæpningen av syntetiske nerveagens, og det påfølgende kjemivåpenkappløpet som oppstod etter 2. verdenskrig, ble kjemivåpenkonvensjonen etablert og effektuert i 1997. Konvensjonen forbyr all anskaffelse, produksjon, lagring og bruk av kjemiske agens i krig, men det er i ettertid påvist bruk, senest i 2020 ved attentforsøk på Putin- kritiker Aleksej Navalnyj.
Ved eksponering for nerveagens, vil agenset binde til acetyl- og butyrylkolinesteraser (AChe, BuChE) i blodet, som fører til tap av en rekke fysiologiske funksjoner som i ytterste konsekvens medfører død. En metode for å påvise og identifisere eksponering for nerveagens (OPNA) i dag er å måle adduktert butyrylkolinesterase (OP-BuChE) i venøst blod. Prøveopparbeidingen består av immunomagnetisk separasjon (IMS) med påfølgende analyse med væskekromatografi tandem massespektrometri (LC-MS/MS). Metoden stiller krav til faglig autorisert personell for prøvetaking, samt temperaturkontroll (2-8°C) ved transport og oppbevaring. For redusering av krav til personell og transport, er det av interesse å utvikle nye prøvetakingsmetoder, eksempelvis ved bruk av dried blood spots (DBS). Videre effektivisering av DBS som prøvetakingsmetode er å inkorporere immunoekstraksjon, og dermed forkorte tiden mellom prøvetaking og fremleggelse av analyseresultat.
Målet med oppgaven var å undersøke om antistoff-antigen-spesifisiteten som utnyttes i IMS kunne videreføres til DBS ved immobilisering av antistoff til filterpapir.
Det ble undersøkt to ulike funksjonaliseringer av DBS som baserer seg på metodene beskrevet av Johannsen et al. og Mrsa et al.. Johannsen et al. immobiliserer antistoffet på filterpapir av type WhatmanR filterpaper grade 1 ved å benytte streptavidin-biotin binding som forankring av antistoffet. Mrsa et al. benytter divinylsufon som forankring for immobilisering av antistoffet på WhatmanR filterpaper grade CF12.
Resultatene viste at både filterpapir av grad 1 og CF12 evnet å binde fritt BuChE i serum med et signal-til-støy-forhold (S/N) > 3. Filterpapir av grad 1 festet 7,9 ganger mer BuChE enn CF12. Beregnet p-verdi på 0,0056 (student t-test) indikerte at dette skyldtes metodespesifikke egenskaper. De funksjonaliserte filterpapirene ble deretter applisert OPNA-eksponert serum, og mengden festet OP-BuChE ble sammenlignet med standard IMS, som festet henholdsvis 10,13 og 2,41 ganger mer OP-BuChE enn grad 1 og CF12. En ANOVA post hoc Tukey test indikerte at den ulike mengden bundet OP-BuChE skyldtes metodespesifikke egenskaper.
Det ble observert fra resultatene at de ulike funksjonaliseringsmetodene, som benyttet ulike typer filterpapir, utviste et bytte i mengden bundet BuChE avhengig av om det var binding av fritt BuChE eller OP-BuChE. Da det kun ble utført én serie med fem replikater per metode, var det ikke mulig å identifisere om byttet skyldtes tilfeldige eller systematiske feil, eller var på grunn av bindingen til OPNA.
Forsøket ble ansett som vellykket da begge funksjonaliseringsmetodene festet fritt BuChE og OP-BuChE i serum med detekterbare mengder (S/N > 3). Resultatene for serum er ikke nødvendigvis reproduserbare ved applisering av blod, på grunn av andre komponenter i prøven og ukjente matrikseffekter. Videre arbeid bør vektlegge evalueringen av ulike forankringsmetoders stabilitet på tvers av filterpapir, samt en påfølgende vurdering av reproduserbarheten til den valgte metoden. | en_US |
