The role of the metastasis promoting protein S100A4 during EMT in mammary gland epithelial cells
Master thesis
Permanent lenke
https://hdl.handle.net/10642/2228Utgivelsesdato
2013Metadata
Vis full innførselSamlinger
Sammendrag
Breast cancer is one of the greatest contributors to mortality among the different cancer types in the
female population of the western world each year. An increasing degree of evidence state that the
S100A4 protein, which has been identified in several tumors of different origins and has proven to be
associated with a poor patient prognosis, might have an important role in a process which induces
carcinoma cells of the breast to gain a more motile and invasive phenotype. This process, which
enables metastasis of carcinoma cells, is termed epithelial-to-mesenchymal transition (EMT).
In the current study, immortalized human mammary epithelial cells were used to investigate noncancerous
epithelial cells ability to undergo EMT when the expression of S100A4 had been knocked
down by lentiviral transduction. The knock-down cells were subsequently stimulated with TGF-1 for
eight days to induce EMT.
In order to evaluate whether the epithelial cells had undergone EMT, established markers identifying
mesenchymal status of the cells were tested, including morphology observed by phase contrast
microscopy, mRNA expression of several biological markers associated with EMT, as well as
immunofluorescence staining of E-cadherin observed by microscopy to monitor any change in the
cells distribution pattern. The observed results indicate that the epithelial cells of the HMLE cell line,
regardless of expressing S100A4 or not, were able to gain mesenchymal characteristics as a result of
TGF-1 stimulation, indicating an ability to undergo EMT even though the cells are not expressing
S100A4. Blant kvinner i den vestlige verden er dødesfall som følge av brystkreft en av hovedårsakene til
kreftrelatert dødelighet hvert år. S100A4 proteinet har blitt identifisert i flere krefttyper av ulik
opprinnelse, og tilstedeværelse av proteinet assosieres ofte med dårlig sykdomsprognose. Det antas at
S100A4 spiller en viktig rolle i en biologisk prosess hvor karsinomceller induseres til å uttrykke
biologiske markører assosiert med mesenkymale celler. Denne prosessen, som gir kreftcellene økt
metastatisk potensiale, kalles epitelial-til-mesenkymal transisjon (EMT).
HMLE cellelinjen bestående av immortaliserte epitelceller fra bryst ble benyttet for å undersøke
normale epitelceller fra bryst (ikke kreftceller) sin evne til å gjennomgå EMT når utrykket av S100A4
var slått av ved hjelp av lentivirus transduksjon. Cellene hvor S100A4 var blitt slått av ble senere
stimulert med TGF-1 i åtte dager for å indusere EMT.
For å kunne avgjøre om epitelcellene hadde gjennomgått EMT, ble utrykket av etablerte biologiske
markører assosiert med mesenkymal status evaluert. Mesenkymal status ble evaluert ut i fra morfologi,
grad av mRNA uttrykt av ulike biologiske markørene assosiert med EMT, samt immunofluorescens
farging av celler dyrket på dekkglass for å påvise cellulær distribusjon av E-caderin. Resultatene av
disse testene indikerte at epitelcellene fra HMLE cellelinjen kunne gjennomgå EMT som et resultat av
TGF-stimulering, uavhengig av om de uttrykker S100A4 eller ikke.
Beskrivelse
Master i biomedisin
Utgiver
Oslo and Akershus University CollegeOslo University Hospital