Interferens fra revmatoid faktor i multiplex cytokinanalyser

Abstract

Feilmåling forårsaket av revmatoid faktor (RF), som ofte finnes i blod hos pasienter med revmatoid artritt (RA), er en kjent problemstilling i immunoassays. Men diagnostiske analyser er nå ofte beskyttet ved at reagensene er tilsatt blokkerende antistoffer. Multiplex immunoassay er kule-basert ELISA teknologi der mange biomarkører kan analyseres samtidig i samme prøvebrønn. Men det har vært vist at multiplex-analysene er utsatt for interferens fra RF og andre heterofile antistoffer. Teknologien benyttes i utstrakt grad til forskning, blant annet til analysering av cytokiner for studering av immunologiske prosesser hos pasienter med RA. Hovedmålet med denne studien var å kartlegge forekomst av interferens i multiplex cytokinanalyser hos pasienter med RA og sammenligne to ulike analyse-kit. Materialet var 72 serumprøver fra en eksisterende kohortstudie (ULRABIT) som inneholder prøver og data fra pasienter med revmatoid artritt. Prøvene er analysert med multiplex 27-plex og 24-plex analyse-kit fra to leverandører. De samme prøvene ble også analysert for Interleukin-6 (IL-6) på en immunoassay-rutineplattform. For å blokkere interferens av RF ble det benyttet en inhouse modifisert blokker. To andre mål med studien var å vurdere om høyt nivå av RF i prøven var assosiert med et større antall interferens, og om tilsetning av interferensbeskyttelse ga cytokinverdier som korrelerte bedre med sykdomsaktivitet. Resultatene viste interferens i henholdsvis 14 % og 25 % av cytokinmålingene for hver av leverandørene, men forskjellen var ikke entydig statistisk signifikant. Det ble ikke påvist interferens i IL-6 analysen med ordinær heterogen immunoassay-prinsipp. Det ble funnet statistisk signifikant forskjell i antall interferenser mellom prøver med høyt nivå av RF IgM og prøver med negativ eller lav konsentrasjon av RF IgM, men det var også mange unntak. For RF IgA var det ingen sammenheng mellom antall interferenser og konsentrasjon av RF IgA. IL-6 korrelerte signifikant med de fleste parametere på sykdomsaktivitet og biomarkører for inflammasjon, men forbehandling med interferensbeskyttelse ga ikke resultater som korrelerte bedre med sykdomsaktivitet. Som konklusjon ble interferens sett i en betydelig andel prøver og cytokinmålinger med begge multiplex analyse-kit som ble undersøkt. Det kan ikke ut fra målt konsentrasjon av RF IgM avgjøres om prøver skal forbehandles eller ikke. Forbehandling med blokkerende antistoffer anbefales for alle prøver som skal analyseres med multiplex immunoassay.